DNA Diagnostic HemaVision HemaVision-4;11
本製品は研究用です。治療および診断目的に使用することはできません。
- 研究用
HemaVision RT-non Nested PCRシリーズは、multiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する各種の染色体転座を検出する試薬です。染色体異常により生じた融合遺伝子を、PCRとゲル電気泳動により、迅速に検出することができます。
本製品はKMT2A-AFF1融合遺伝子 t(4;11)(q21;q23)(KMT2A-AFF1) および切断点(breakpoint)を検出します。
※本製品はsingle translocationの検出用です。複数転座箇所の解析にはHemaVision-7(DND-HV01-7)をご使用ください。
製品の特長
本製品はmultiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する染色体転座 t(4;11)(q21;q23)(KMT2A-AFF1) および切断点を検出する試薬です。
<HemaVision RT-non Nested PCRシリーズの特長>
- 高い特異性:標的遺伝子に特異的なプライマーを用いたPCR
- 低い検出限界:RNA 1 µg中に存在する10-8 µgの 転座RNAを検出可能
- 逆位の検出が可能:FISH法では困難な変異も検出(inv16)
- 結果の解釈が容易:PCR産物の電気泳動結果と対応表より転座箇所を特定
- 正確な実験:内部標準を同時に解析、実験の妥当性を検証可能
- 迅速:抽出RNAから短時間で結果取得(4-5時間)
- 簡単な手法:標準的なサーマルサイクラーおよびプロトコルを使用
※特異性のより高い製品をご希望の場合は、HemaVision RT-Nested PCRシリーズをご利用ください。
<検出可能な切断点について>
下記の切断点(融合遺伝子)を検出できます。
<実験ステップについて>
① total RNA抽出
全血、細胞株、単核球、骨髄細胞などからRNAを抽出します。
② cDNA合成
製品に含まれているプライマーセットおよびcDNA合成試薬を使って、cDNAを合成します。
③ PCR
複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてPCRを行います。
④ 電気泳動
PCR産物の電気泳動を行います。転座が起きていると、ハウスキーピング遺伝子由来のDNAバンドの他にDNAバンドが観察されます。
<電気泳動のイメージ図>
980 bp付近のバンドは内部標準由来、それ以外は転座箇所由来となります。
・サンプル1では、980 bp付近にのみバンドが出ています。このため、サンプル1は転座が無いと判断されます。
・サンプル2では、980 bp付近のバンドとは別に、400 bp付近にバンドが出ています。このため、サンプル2は転座が有ると判断されます。
⑤ 転座(切断点)判別
転座箇所由来のDNAバンドの位置(bp)をプロトコルの表と照らし合わせ、転座の同定(切断点含む)を行います。
上記の例の場合、対応表よりサンプル2の転座および切断点は t(4;11)(q21;q23)(KMT2Aex8-AFF1ex6) となります。
<本製品の構成について>
- Primer Mix cDNA:cDNA合成用プライマーセットのミックス(1本)
- Primer Mix PCR:PCR用プライマーセットのミックス(1本)
※PCR用プライマーセットには、転座箇所特異的なプライマーセットおよび、ハウスキーピング遺伝子(内部標準)に特異的なコントロールプライマーセットが含まれています。
別途、以下の試薬が必須となります。
- Reagents Module with DNA Polymerase (DND-HV06-RMP):cDNA合成に必要な逆転写酵素、PCR酵素、バッファーやdNTPなど
※本製品1キットあたり2キット使用します。
- RNase Free Water:ネガティブコントロール、試薬調製用
以下の試薬は任意です。
- HemaVision-7 Positive Controls (DND-HV05-7PC):ポジティブコントロールRNA
※本製品1キットあたり4キット使用します。
- cDNA合成前のRNA:ネガティブコントロール
<HemaVision RT-non Nested PCRシリーズと検出する転座について>
詳細は各製品ページをご確認ください。
製品コード | 製品名 | 検出転座 |
DND-HV03-119 | HemaVision-1;19 | t(1;19)(TCF3-PBX1) |
DND-HV03-411 | HemaVision-4;11 | t(4;11)(MLL-AFF1) |
DND-HV03-821 | HemaVision-8;21 | t(8;21) (RUNX1-RUNX1T1) |
DND-HV03-922 | HemaVision-9;22 | t(9;22) (BCR-ABL1) |
DND-HV03-1221 | HemaVision-12;21 | t(12;21)(ETV6-RUNX1) |
DND-HV02-1517 | HemaVision-15;17 | t(15;17) (PML-RARA) |
DND-HV03-16 | HemaVision-inv16 | inv16(CBFB-MYH11) |
DND-HV01-7 | HemaVision-7 | 上記7種すべて |