Laminin-521とは

Laminin-521は通常ヒトES細胞で発現分泌されるラミニンです（その他、腎臓、神経筋接合部、肺、胎盤でも見つかっています）。
ヒトES/iPS 細胞はLaminin-521 をコーティングした表面ではモノレイヤーで増殖し、均質な細胞として培養されます。トリプシン消化またはEDTA処理（酵素を使用しないで）してsingle cell suspension をプレーティングする簡単な方法で継代培養可能です。
ROCK阻害剤（ROCKi）不要、defined、フィーダーフリー、動物由来成分フリーの培養システムで多能性マーカーを発現するヒトES/iPS 細胞の自己再生を長期にわたり促進します。その増殖はマトリゲル（Matrigel） 上での増殖より早く安定しています。

動画：Laminin-521 をコーティングした表面上でES細胞がモノレイヤーで増殖する様子

操作手順

1. Laminin-521をプレートへコーティング
2. PBSでコンフルエントになった細胞を洗浄及びTrypLE/Trypsin/EDTAを添加し、1-5分インキュベーション
3. Single cell suspensionを遠心後、新しい培地で細胞ペレットを再懸濁
4. Laminin-521をコートしたプレート上に最適な量の細胞及び培地を添加

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データ例

Laminin-521ならROCK阻害剤なしでも培養可能

Human recombinant Laminin-521、mouse laminin-111、Matrigel上で酵素処理しバラバラにされたhES細胞をROCK阻害剤なしで培養した細胞生存についての結果です。また、培地にmTeSR1（STEMCELL Technologies社、商品コード：ST-85850）を使用しsingle cell suspensionでプレーティングされhES細胞は、ROCK阻害剤（Y-27632）を添加したものおよび添加しないもので24時間培養後にクリスタルバイオレットで染色されました。
Human recombinant Laminin-521上で培養したhES細胞のみ、ROCK阻害剤なしでの生存が確認されました。

Laminin-521ならROCK阻害剤なしでも培養可能

ROCK阻害剤なし、シングルセルの状態で、ヒトES細胞は急速にまたは数ヶ月間連続して増殖しました。ヒトES細胞をクランプの状態でMatrigel上にて培養するよりも、簡単で長期間効率的に培養できます。

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