ラーニングコーナー
2000/02/14
Method Library -細胞分離-
- 用途別細胞培養
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ラボの基本
ラボを初めて使用する場合でも、知識を更新する必要がある場合でも、参照する基礎研究手法に関するリソースがあると便利です。細胞培養、基本的な細胞分離法、基本的な細胞アッセイ、またはその他の重要な分子生物学技術の概要については、ここから始めてください。
細胞分離法
遠心分離
遠心分離の時間と条件は、開始サンプル、分離方法、および分離する細胞タイプによって異なります。セル分離プロトコルをニーズに合わせてカスタマイズするためのガイダンスについては、これらのリソースを参照してください。また、特定のワークフロー用に最適化されたさまざまな細胞分離テクノロジーのサポートもあります。
免疫密度細胞分離
赤血球ロゼットとも呼ばれる免疫密度細胞分離は、抗体ベースの標識と密度勾配遠心分離を組み合わせたネガティブセレクション法です。これらのリソースを調べて、免疫密度細胞分離プロトコルを合理化して最大限に活用する方法を学びましょう。サンプルの処理時間を短縮する方法や、カラムや磁石を使用せずに特定の細胞サブセットを血液から直接分離する方法などのトピックに関する技術的なヒントとプロトコルを見つけることができます。
ポジティブセレクションによる免疫磁気細胞分離
ポジティブセレクション免疫磁気細胞分離法は、特定の細胞表面タンパク質を標的とする抗体またはリガンドを使用して、選択のために所望の細胞を直接標識することを含みます。ポジティブセレクションによる免疫磁気細胞分離に関する技術的なヒントとサポートについては、これらのリソースをご覧ください。ポジティブまたはネガティブセレクション戦略の選択方法、細胞枯渇のためのポジティブセレクションの使用などのトピックに関する情報を見つけることができます。
ネガティブセレクションによる免疫磁気細胞分離
ネガティブセレクション免疫磁気細胞分離法は、特定の細胞表面タンパク質を標的とする抗体またはリガンドを使用して、除去のために不要な細胞タイプを標識することを含みます。この技術リソースとプロトコルのコレクションを使用して、ネガティブセレクションによる免疫磁気細胞分離のサポートを受けてください。トピックには、ネガティブセレクションで細胞回復を改善する方法と、ポジティブまたはネガティブセレクション戦略を選択する方法が含まれます。
自動免疫磁気細胞分離
免疫磁気細胞分離の自動化は、サンプル処理の標準化とサンプルスループットの向上に役立ちます。RoboSep™機器による細胞分離の自動化の詳細については、ビデオ、ガイド、ケーススタディなどの以下のリソースを使用してください。RoboSep™-Sでの実行の開始や、単一のサンプルから複数の細胞タイプを取得するための順次細胞分離などのトピックに関するサポートを見つけてください。
赤血球の除去
機能研究またはダウンストリームアッセイのために特定の細胞タイプを血液から分離する場合、赤血球(RBC)の枯渇が必要になる場合があります。ここでは、細胞分離の前に血液サンプルからRBCを枯渇させる方法に関する技術的なヒントとプロトコルを紹介します。これには、さまざまな種類の血液サンプルからRBCを除去する方法や、塩化アンモニウムを溶解せずにRBCを枯渇させる方法が含まれます。
Protocol | 全血から多形核細胞(顆粒球)を塩化アンモニウム溶血で調製する方法 |
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Technical Bulletin | 新鮮血液サンプルからの赤血球除去 |
少量の臍帯血サンプルからの赤血球除去 | |
Video | 全血から有核細胞を赤血球凝集で分離(HetaSep) |
少量サンプルからの赤血球除去(HetaSep) |
沈降
沈降は、赤血球を除去し、血液サンプルから有核細胞を取得するための1つの手法です。沈降やHetaSep™などの製品を使用して血液サンプルから有核細胞を取得する方法については、ステップバイステップの説明ビデオを含むこれらのリソースをご覧ください。
Technical Bulletin | 新鮮血液サンプルからの赤血球除去 |
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Video | 全血から有核細胞を赤血球凝集で分離(HetaSep) |
少量サンプルからの赤血球除去(HetaSep) |
サンプルの準備と保管
シングルセルサスペンジョン(単一細胞懸濁液)の調製
単一細胞懸濁液から始めることは、下流の細胞分離を成功させるために不可欠です。これらの技術リソースを調べて、組織または細胞培養サンプルから単一細胞懸濁液を調製するのに役立ててください。マウスの脾臓から単細胞懸濁液を調製する方法や、塊状の細胞懸濁液を処理する方法などのトピックに関するプロトコルとサポートがあります。
Protocol | シングルセル懸濁液の細胞凝集をDNase Iで減らす方法 |
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マウス脾臓からシングルセル懸濁液を調製する方法 | |
フローサイトメトリーのためのマウス骨髄細胞の分離・染色方法 | |
Technical Bulletin | 細胞分離用サンプルの評価と回収率の計算 |
多様な組織サンプルからの細胞分離 | |
組織解離のためのプロトコール集 |
分離された細胞の保存
分離された免疫細胞の保存と凍結保存は、研究ワークフローの重要なステップです。分離直後に細胞を分析できない場合の細胞の保存方法と、後で使用するためのサンプル保存の検討に関するリソースを以下に示します。
Protocol | 凍結プライマリーセルを解凍する方法 |
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末梢血単核細胞(PBMC)を凍結保存する方法 | |
Tech Tip | 臍帯血サンプルの保存 |
フローサイトメトリーと保存のための細胞の冷蔵、冷凍、固定 |
血液サンプルの準備方法
全血は、血漿、赤血球、血小板、および有核白血球で構成されています。白血球除去システム(LRS)コーンなどの正常な末梢血から収集された濃縮白血球アフェレーシス製品は、全血と比較して多数の末梢血単核細胞(PBMC)で構成されています。分離する細胞の種類と開始血液サンプルソースに応じて、さまざまな手法を使用して、下流の細胞分離用の開始血液サンプルを処理および準備します。以下を調べて、全血サンプル、ロイコパック、LRSコーンを処理するためのプロトコル、および下流の細胞分離の方法を見つけてください。
Protocol | Leukopak(アフェレーシス採取白血球)から細胞分離する方法 |
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古い血液サンプルから顆粒球を除去する方法 | |
全血からバフィーコートを調製する方法 |