DNA Diagnostic HemaVision HemaVision-7Q
本製品は研究用です。治療および診断目的に使用することはできません。
- 研究用
HemaVision RT-qPCRシリーズは、multiplex RT-qPCR法によって、白血病に関連する各種の染色体転座を検出する試薬です。染色体異常により生じた融合遺伝子をリアルタイムPCR（qPCR）で検出するため、短時間・高感度のスクリーニングが可能です。
本製品は7箇所の転座および40箇所以上の切断点（breakpoint）を検出します。
※本製品は3タイプのPCRチューブがあり、それぞれ製品コードが異なります。お使いのqPCR用サーマルサイクラーに適したチューブを選択してください。
0.1 ml白色タイプ（DND-HV01-7Q-WLP）、0.2 ml白色タイプ（DND-HV01-7Q-WRP）、0.2 mlクリアタイプ（DND-HV01-7Q-CRP）
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
本製品はmultiplex RT-qPCR法によって、白血病に関連する7箇所の染色体転座および切断点を検出する試薬です。
＜HemaVision RT-qPCRシリーズの特長＞
- 高い特異性：標的遺伝子に特異的なプライマーを用いたqPCR
- 逆位の検出が可能：FISH法では困難な変異も検出（inv16）
- 結果の解釈が容易：qPCRの増幅結果と対応表より転座箇所を特定
- 正確な実験：内部標準を同時に解析、実験の妥当性を検証可能
- 迅速：抽出RNAから短時間で結果取得（約4時間）
- 簡単な手法：標準的なqPCR用サーマルサイクラーおよびプロトコルを使用
- 低コスト：multiplex qPCRにより1度の実験で複数遺伝子を解析可能
より簡便な解析を行いたい場合は、HemaVision RT-non Nested PCRシリーズや、HemaVision RT-Nested PCRシリーズをご利用ください。
＜検出可能な転座箇所および切断点について＞
以下の転座箇所が検出可能です。
| t(1;19) (q23;p13) (TCF3-PBX1) | t(12;21) (p13;q22) (ETV6-RUNX1) |
| t(4;11) (q21;q23) (KMT2A-AFF1) | t(15;17) (q24;q21) (PML-RARA) |
| t(8;21) (q22;q22) (RUNX1-RUNX1T1) | inv(16) (p13;q22) (CBFB-MYH11) |
| t(9,22) (q34;q11) (BCR-ABL1) |
〇検出遺伝子とチューブの組み合わせ
＜実験ステップについて＞
① total RNA抽出
全血、細胞株、単核球、骨髄細胞などからRNAを抽出します。
② cDNA合成
製品に含まれているcDNA合成試薬とチューブを使って、cDNAを合成します。
③ qPCRチューブへの分注
合成したcDNAをqPCR用チューブの7箇所に分注します。チューブにはあらかじめqPCR用の試薬が分注されています。8チューブの内、1-6は転座箇所および内部標準の検出用、7はネガティブコントロール、8はreference gene（ABL1遺伝子）および内部標準の検出用となります。
④ qPCR
qPCR装置での増幅を行います。チューブにより、標的とする転座箇所が異なります。FAM標識およびROX標識の増幅産物は転座箇所およびreference gene由来、Cy5標識の増幅産物は内部標準由来となります。
⑤ 転座（切断点）判別
各チューブにおいて、増幅が認められた蛍光の種類と、Ct値を確認します。
＜図1：各種コントロールのqPCR増幅曲線例＞
図1の場合、チューブ1-6および8において、Cy5標識（内部標準）のPCR増幅が問題なく行われています。またチューブ8におけるFAM標識（reference gene）のPCR増幅のCt値が規定値（29）以下のため、実験は妥当であると判断されます。
次に、チューブ1-6の結果を確認します。
＜図2：サンプルチューブのqPCR増幅曲線例＞
FAM標識あるいはROX標識のPCR増幅のCt値が規定値（35）以下だった場合、転座が有ると判断されます。
図2の場合、チューブ2においてFAM標識のPCR増幅が確認されています。Ct値が規定値未満のため、チューブ2のFAM標識プライマーで増幅される転座が有ると判断されます。この結果をプロトコルの表と照らし合わせ、転座の同定（切断点含む）を行います。図の場合、転座および切断点は t(15;17)(q24;q21)(PML-RARA, bcr3, S-form)となります。
＜本製品の構成について＞
- cDNA tubes with reaction mix：cDNA合成用試薬入りPCRチューブ（12本）
- qPCR tubes with qPCR reaction mix：qPCR用試薬入り8連PCRチューブ（12本）
- qPCR tubes：予備のqPCR用チューブ（12本）
- RNase Free Water：ネガティブコントロール、RNA希釈用（2本）
※本製品は3タイプのqPCRチューブがあり、それぞれ製品コードが異なります。お使いのqPCR用サーマルサイクラーに適したチューブを選択してください。0.1 ml白色タイプ（DND-HV01-7Q-WLP）、0.2 ml白色タイプ（DND-HV01-7Q-WRP）、0.2 mlクリアタイプ（DND-HV01-7Q-CRP）
別途以下の製品が必要です。
- qPCR用アダプタープレート：お使いの機種に応じて対応する製品が異なります。
＜チューブおよびサーマルサイクラー、アダプターの対応表＞
「x」マークのある製品が各機器に対応しています。
下記に記載の無いqPCR機器を使用されたい場合は弊社にお問い合わせください。
*：機器付属のアダプター（製品No. 4359652）をお持ちの場合はそちらをお使いください。
**：初回使用前にHemaVision用のColor Compensation kitを使用して色調補正を行ってください。Color Compensation kitについては弊社にお問い合わせください。
***/****/*****：HemaVision製品付属のチューブでは解析ができません。解析前に各機器に対応した専用のチューブにサンプルを移し替えて解析してください。
＜HemaVision RT-qPCRシリーズについて＞
28箇所の転座を検出可能なHemaVision-28Qもございます。詳細は製品ページをご確認ください。
