製品の特長

JAKファミリーは非受容型チロシンキナーゼで、JAK1/JAK2/JAK3/TYK2で構成されます。JAK-STATシグナル伝達経路は、サイトカインなどにより調節され、細胞の増殖や分化、細胞死、免疫などを制御しています。

JAK2遺伝子の変異による活性化は、骨髄増殖性疾患と関連しており、主な診断指標となります。

本製品はADx-ARMS法によって、全血サンプルからJAK2遺伝子のV617F変異を検出する試薬です。

＜Amoy Diagnostics社Real-time PCR Assayシリーズの特長＞

• 簡便な操作：ワンステップの操作、解析まで含めわずか90分
• 高感度、高い正確性：1%の変異遺伝子まで検出可
• 高信頼性：内部標準も同時検出、ポジティブコントロールもキットに同梱
• 高品質の製品：国際基準ISO13485を取得し、GMPプラントにて製造、管理

＜ADx-ARMS法の原理＞

ADx-ARMS（Amplification Refractory Mutation System）法は、3'末端に変異特異的なプローブを使用し、高感度に変異遺伝子を検出する技術です。 チューブ内で、2ステップの増幅を行います。ステップ1で特異性の高い増幅を、ステップ2で効率良い増幅を行います。

＜本製品の構成について＞

• V617F Reaction Mix：変異遺伝子および内部標準を検出するプライマー、プローブ、Mg²⁺⁺、dNTPs
• JAK2 Enzyme Mix：Taq DNA Polymerase、Uracil-N-Glycosylase
• JAK2 Positive Control：プラスミドDNA

＜実験ステップについて＞

① total DNA抽出：全血サンプルからDNAを抽出します。

※DNA抽出試薬は本製品に含まれておりません。

② DNA濃度調整：2-3 ng/µlとなるように1×TE buffer (pH 8.0)でDNA溶液を希釈します。

③ PCR試薬の調製：Enzyme MixおよびReaction Mixを混合し、PCRチューブに分注します。

④ サンプル分注：調整したDNAサンプルおよびネガティブコントロール（水）、キット付属のPositive Controlを各チューブに加えます。

⑤ Real-time PCR：マニュアル記載の条件でReal-time PCRを行います。

⑥ 結果判別：増幅が認められた蛍光の種類と、Ct値を確認します。

＜結果例＞

ネガティブコントロール・Positive Control・各サンプルのHEX/VIC標識（内部標準由来）のPCR増幅結果から、実験が妥当であるかを判断します。

次にマニュアル記載の基準に基づき、各チューブのFAM標識の増幅産物のCt値より、変異陽性か陰性かを判定します。

＜対応するReal-time PCR機器について＞

下記の機器で検証済です。機器によってアダプターが必要になる場合があります。

• Stratagene：Mx3000P
• ThermoFisher Scientific：ABI 7500、ABI 7900HT、StepOnePlus
• Roche：LightCycler480
• Bio-Rad：CFX96

＜Real-time PCR Assayシリーズで検出可能な変異遺伝子＞

がんのシグナル経路に関わる下記遺伝子が検出可能です。 各遺伝子の検出に対応するキットをご利用ください。