注目の製品情報
2019/08/08
「ClonaCell」 CHO細胞株、ハイブリドーマをクローニングする革新的ソリューション
- 細胞分離
- 用途別細胞培養
「ClonaCellによる呼吸器ウイルス感染の研究」最新情報
ハイブリドーマおよびCHO細胞のクローニングは、半固形(半固体、Semi-solid)クローニングを採用することで従来のクローニング技術と比べてより速く、より効率的に行うことができます。半固形クローニングでは、それぞれの細胞が粘性のある半固形培地中に固定化され、個別のモノクローナルコロニーに成長します。これらのコロニーを回収することで、高確率で単クローン性をもつ多様なクローンを数多く単離することが可能になります。半固形クローニングでは、空のクローニングウェルを低減または排除し、より少ないリソースからより多くのクローンを単離することができます。また、成長の速いクローンと遅いクローンのどちらの単離も容易になるため、クローン多様性が向上し、高生産性または機能性の希少なクローンの発見を容易にします。
半固形のメチルセルロースベースと液体、両方の形態で入手可能な「ClonaCell™-CHO」と「ClonaCell™-HY」は、わずか1ステップで高確率の単クローン性およびクローン多様性を達成するのに役立ちます。
適切なClonaCell™培地を選択するため、本稿および 製品カタログ(英語)を併せてご参照ください。
ClonaCellでできること
- 従来の限界希釈クローニングの課題を克服する、実証済みの半固形クローニング法で時間とリソースを節約
- マウス、ラット、ヒト、ウサギ、ハムスターの細胞から作製されたハイブリドーマの育成と保存
- CHO細胞株作製におけるサブクローニング効率の向上
- Dr. M. Javad Aman, President and CSO, Integrated BioTherapeutics, Inc. (IBT)
ClonaCellが使用される理由
- 簡便 半固形クローニングで時短。空のクローニングウェルによる資源の無駄を回避
- 実証済み CHO、ハイブリドーマ、ミエローマなどで優れたクローニング効率と増殖
- 汎用性 メチルセルロース基礎培地は、細胞の種類に合わせて簡単にカスタマイズ可能。組成、梱包、サイズのカスタマイズに応相談
- 一貫性 ロット間の再現性を確実にする厳しい性能試験を実施
- 信頼性 業界で認められた製造の専門知識と、比類のない技術サポート
動物性成分フリーの液体培地は、CHO細胞の適応、増殖およびクローニングに利用できます。
限界希釈法 vs 半固形クローニング法
従来の限界希釈クローニングに比べて、半固形クローニングでは抗体作製過程を大幅に短縮することができます。
詳しくはこちらを御覧ください
ClonaCell関連 動画マニュアル・ウェビナー
ClonaCellを用いた半固形クローニングの利点
96 Well plate を用いるクローニング法
動画マニュアル:「ClonaCell-CHO」によるCHO細胞のクローニング(96ウェルプレート編)
動画マニュアル:「ClonaCell-HY」によるハイブリドーマのクローニング(96ウェルプレート編)
100 mmディッシュ編は、各製品のページからご覧ください。
単クローン性を損なう可能性がある限界希釈法と、それを克服する方法
Webinar: A Smarter Way To Clone: What You Don't Know About Limiting Dilution Can Hurt Your Probability of Monoclonality
ウェビナーを視聴するには、STEMCELL Technologies社ウェブサイトでの登録が必要になります。
用途別 おすすめClonaCell製品
ハイブリドーマ作製向け
前濃縮・融合 | 選択・クローニング | 増殖・同定 | |
ClonaCell™-HY Hybridoma Kit | 〇 | 〇 | 〇 |
ClonaCell™-HY Medium A | 〇 | ||
ClonaCell™-HY Medium B | 〇 | ||
ClonaCell™-HY Medium C | 〇 | ||
ClonaCell™-HY Medium D | 〇 | ||
ClonaCell™-HY Medium E | 〇 | 〇 | |
ClonaCell™-TCS Medium | 〇 | ||
ClonaCell™-HY AOF Expansion & Cloning Medium | 〇 |
CHOとその他の細胞株作製向け
トランスフェクション・選択 | クローニング | 増殖・同定 | |
ClonaCell™ FLEX | 〇 | ||
ClonaCell™-TCS Medium | 〇 | 〇 | |
ClonaCell™-CHO ACF Medium | 〇 | ||
ClonaCell™-CHO CD Medium | 〇 | ||
ClonaCell™-CHO CD Liquid Medium | 〇 | 〇 | |
ClonaCell™-CHO ACF Supplement | 〇 | 〇 | |
ClonaCell™-CHO AOF Supplement | 〇 | 〇 |
STEMCELL Technologies社の細胞株作製用製品のラインナップはこちら>>
ClonaCell各製品の詳細
ハイブリドーマ作製向け
製品名 | サイズ | 形態 | 組成、成分 | 推奨用途 | 特長 |
ClonaCell-HY™ Hybridoma Kit | 1 kit | 下表参照 | ・ClonaCell™-HY Medium A (融合前) ・ClonaCell™-HY Medium B (融合) ・ClonaCell™-HY Medium C (回復) ・ClonaCell™-HY Medium D (選択とクローニング) ・ClonaCell™-HY Medium E (回復) ・ClonaCell™-HY PEG (融合) |
マウスモノクローナル抗体産生の全ステップ: 細胞融合、半固形クローニング/選択、ハイブリドーマ増殖 |
・ハイブリドーマの選択とクローニングを1ステップに統合 ・シングルセル由来のハイブリドーマが個別にコロニーを形成するため選択とスクリーニングが容易 ・過剰増殖による希少クローンの損失を防止 |
ClonaCell™ FLEX | 45 mL | 半固形 | ・無血清 ・Chemically defined ・Animal component-free ・Protein-free ・DHFR, GSに適合 ・メチルセルロース |
・浮遊培養に適応したCHO細胞やハイブリドーマの選択とクローニング用の、半固形カスタム培地の作製 ・様々な細胞の選択とクローニング用に、培地を液体から半固形へ変換 ・浮遊培養で樹立されたCHO細胞の再クローニング |
・様々な細胞に最適化された半固形カスタム培地を作製可能 ・既存の液体培地を使用したクローニングを、半固形クローニング法に変換可能 |
ClonaCell™-HY Liquid HAT Selection Medium | 500 mL | 液体 | ・DMEM ・Pre-selected serum ・Hypoxanthine, aminopterin, and thymidine (HAT) ・Gentamicin ・2-Mercaptoethanol ・L-Glutamine |
・細胞融合後のハイブリドーマの選択 ・限界希釈法による個別のハイブリドーマのクローニング |
液体浮遊培養でのハイブリドーマ選択を簡略化 |
ClonaCell™-HY Medium D without HAT | 90 mL | 半固形 | ・DMEM ・Methylcellulose ・Pre-selected serum ・Gentamycin ・2-Mercaptoethanol ・L-Glutamine |
・ハイブリドーマを1ステップで選択および半固形クローニング(適切な選択剤を併用) ・細胞融合後に使用 |
・ハイブリドーマの選択とクローニングを1ステップに統合 ・シングルセル由来のハイブリドーマが個別にコロニーを形成するため選択とスクリーニングが容易 ・過剰増殖による希少クローンの損失を防止 |
略語:DHFR = Dihydrofolate reductase、GS = glutamine synthetase
ClonaCell™-HY Hybridoma Kitの内容物
製品名 | サイズ | 形態 | 成分 | 用途 |
500 mL | 液体 | ・DMEM ・Pre-selected serum ・L-Glutamine ・Gentamycin ・Supplements ・2-Mercaptoethanol |
融合前のミエローマ細胞の生育をサポート | |
ClonaCell™-HY Medium B | 500 mL | 液体 | ・DMEM ・L-Glutamine ・Gentamycin ・2-Mercaptoethanol |
融合過程で使用 |
ClonaCell™-HY Medium C | 100 mL | 液体 | ・DMEM ・Pre-selected serum ・L-Glutamine ・Gentamycin ・Supplements ・2-Mercaptoethanol |
融合後、HAT選択前にハイブリドーマの生存率を向上 |
ClonaCell™-HY Medium D | 90 mL | 半固形 | ・DMEM ・Pre-selected serum ・L-Glutamine ・Gentamycin ・Supplements ・Hypoxanthine, aminopterin, and thymidine (HAT) ・2-Mercaptoethanol |
1ステップで選択とクローニングを実施 |
ClonaCell™-HY Medium E | 500 mL | 液体 | ・DMEM ・Pre-selected serum ・L-Glutamine ・Gentamycin ・Supplements ・Hypoxanthine and thymidine (HT) ・2-Mercaptoethanol |
HAT選択後のハイブリドーマの生育と増殖をサポート |
CHO細胞とその他の細胞株作製向け
製品 | サイズ | 形態 | 組成、成分 | 推奨用途 | 特長 |
ClonaCell™-CHO CD Medium | 90 mL | 半固形 | ・無血清 ・Chemically defined ・Animal component-free ・Protein-free ・DHFR, GSに適合 ・メチルセルロース ・Kolliphor P188 / Pluronic F68 |
・浮遊培養に適応したCHO細胞の選択とクローニング ・浮遊培養で樹立されたCHO細胞の再クローニング |
・浮遊培養に適応したCHO細胞の選択とクローニング ・浮遊培養で樹立されたCHO細胞の再クローニング |
ClonaCell™ FLEX | 45 mL | 半固形 | ・無血清 ・Chemically defined ・Animal component-free ・Protein-free ・DHFR, GSに適合 ・メチルセルロース |
・浮遊培養に適応したCHO細胞やハイブリドーマの選択とクローニング用の、半固形カスタム培地の作製 ・様々な細胞の選択とクローニング用に、培地を液体から半固形へ変換 ・浮遊培養で樹立されたCHO細胞の再クローニング |
・様々な細胞に最適化された半固形カスタム培地を作製可能 ・既存の液体培地を使用したクローニングを、半固形クローニング法に変換可能 |
ClonaCell™-CHO CD Liquid Medium | 500 mL | 液体 | ・無血清 ・Chemically defined ・Animal component-free ・Protein-free ・DHFR, GSに適合 ・Kolliphor P188 / Pluronic F68 |
・浮遊培養に適応したCHO細胞の培養 ・選択とクローニングのためのCHO細胞の馴化 ・半固形クローニング後のCHO細胞の増殖 ・CHO細胞の限界希釈クローニング(ClonaCell™-CHO ACF Supplementを併用) ・CHO細胞の凍結保存(DMSO使用) |
・Chemically defined、Animal component-free、Protein-freeの条件下でCHO細胞を増殖可能 ・他のClonaCell™全製品に適合 |
ClonaCell™-CHO ACF Medium | 90 mL | 半固形 | ・無血清 ・Animal component-free ・DHFR, GSに適合 ・メチルセルロース ・Supplements ・Kolliphor P188 / Pluronic F68 |
・浮遊培養に適応したCHO細胞の選択とクローニング ・浮遊培養で樹立されたCHO細胞の再クローニング |
・組み換えタンパク質と合成成分のみ含有 ・Chemically defined、Protein-freeの培地と比べてCHO細胞のシングルセルクローニング効率が高い(特に、低い播種密度で) |
ClonaCell™-CHO ACF Supplement | 2.5 mL | 液体 | ・無血清 ・Animal component-free ・DHFR, GSに適合 ・Supplements |
・Chemically defined、Protein-freeの培地に添加して、シングルセルクローニングおよび増殖中のCHO細胞の生育を促進 ・CHO細胞増殖のサポート |
・組み換えタンパク質とChemically definedな成分のみを含む40倍濃縮液 ・血清や加水分解物を含まない |
ClonaCell™-CHO AOF Supplement | 2.5 mL | 液体 | ・無血清 ・Animal origin-free ・フェノールレッドフリー |
・Chemically defined、Protein-freeの培地に添加して、シングルセルクローニングおよび増殖中のCHO細胞の生育を促進 ・CHO細胞増殖のサポート |
・組み換えタンパク質とChemically definedな成分のみを含む40倍濃縮液 ・イメージングにも最適 |
ClonaCell™-TCS Medium | 80 mL | 半固形 | ・血清含有 ・メチルセルロース ・2-Mercaptoethanol ・L-Glutamine |
・浮遊または接着培養のCHO細胞およびその他の細胞株の、選択、クローニング、再クローニング ・高いクローニング効率と確実なコロニー形成を要する用途 |
様々な細胞株で高いクローニング効率と確実なコロニー形成をサポート(CHO-K1、CHO-S、HEK-293、B16F-10、BaF / 3、BHK-1、FD-5、Jurkat Daudi、Molt4、UT-7など) |
略語:DHFR = Dihydrofolate reductase、GS = glutamine synthetase
ClonaCellの主要文献 アプリケーション別
抗コロナウイルス抗体作製(ハイブリドーマ作製)
- Berry JD et al. (2004) Development and characterisation of neutralising monoclonal antibody to the SARS-coronavirus. J Virol Methods 120(1): 87–96.
- Nieto-Torres JL et al. (2011) Subcellular location and topology of severe acute respiratory syndrome coronavirus envelope protein. Virology 415(2): 69–82.
- Lip KM et al. (2006)Monoclonal antibodies targeting the HR2 domain and the region immediately upstream of the HR2 of the S protein neutralize in vitro infection of severe acute respiratory syndrome coronavirus. J Virol 80(2) 941-50. J Virol 90(9) 4357–4368.
細胞株作製
- Ling SSM et al. (2015) Instrumental Role of Helicobacter Pylori γ-Glutamyl Transpeptidase in VacA-Dependent Vacuolation in Gastric Epithelial Cells. PLoS One 10(6): e0131460.
- Rodríguez L et al. (2015) Generation of Monoclonal Antibodies Specific of The Postfusion Conformation of The Pneumovirinae Fusion (F) Protein. J Virol Methods.
- Young J et al. (2015) A Novel Immunoassay to Measure Total Serum Lymphotoxin-α Levels in The Presence of An Anti-LTα Therapeutic Antibody. J Immunol Methods Epub ahead.
- Chronopoulou E et al. (2014) Hybridoma Technology for The Generation of Rodent mAbs via Classical Fusion. In: Ossipow V, N Fischer (Eds.) Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 2nd Ed. New York: Springer Science+Business Media.: pp47–70.
- Date Y et al. (2014) Label-Free Impedimetric Immunoassay for Trace Levels of Polychlorinated Biphenyls in Insulating Oil. Anal Chem 86(6): 2989–2996.
- García-Barreno B et al. (2014) Characterization of An Enhanced Antigenic Change in The Pandemic 2009 H1N1 Influenza Virus Haemagglutinin. J Gen Virol 95(PART 5): 1033–1042.
- Tan GS et al. (2014) Characterization of a Broadly Neutralizing Monoclonal Antibody That Targets The Fusion Domain of Group 2 Influenza A Virus Hemagglutinin. J Virol 88(23): 13580–13592.
- Kelly-Cirino CD & Mantis NJ. (2009) Neutralizing Monoclonal Antibodies Directed Against Defined Linear Epitopes on Domain 4 of Anthrax Protective Antigen. Infect Immun 77(11): 4859–4867.
- Weidanz J a et al. (2006) Levels of Specific Peptide-HLA Class I Complex Predicts Tumor Cell Susceptibility to CTL Killing. J Immunol 177(8): 5088–5097
異なる動物種でのハイブリドーマ作製
- Chronopoulou E et al. (2014) Hybridoma Technology for the Generation of Rodent mAbs via Classical Fusion. In: Ossipow V, N Fischer (Eds.) Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 2nd Ed. New York: Springer Science+Business Media.: pp47–70.
- Cesaro A et al. (2012) An Inflammation Loop Orchestrated by S100A9 and Calprotectin Is Critical for Development of Arthritis. PLoS One 7(9): e45478.
- Smith S a. et al. (2012) Persistence of Circulating Memory B Cell Clones with Potential for Dengue Virus Disease Enhancement for Decades following Infection. J Virol 86(5): 2665–2675.
- Fang L et al. (2008) Essential Role of TNF Receptor Superfamily 25 (TNFRSF25) in the Development of Allergic Lung Inflammation. J Exp Med 205(5): 1037–1048.
- Ulbrandt ND et al. (2006) Isolation and Characterization of Monoclonal Antibodies Which Neutralize Human Metapneumovirus In Vitro and In Vivo. J Virol 80(16): 7799–7806.
- Grimaldi JC et al. (1999) Depletion of Eosinophils in Mice through the Use of Antibodies Specific for C-C Chemokine Receptor 3 (CCR3). J Leukoc Biol 65(6): 846–853.
薬理学と創薬
- Cabral TM et al. (2014) Development of Neutralizing Monoclonal Antibodies against The Pandemic H1N1 Virus (2009) Using Plasmid DNA Immunogen. J Virol Methods 195: 54–62.
- Retamal M et al. (2014) Epitope Mapping of The 2009 Pandemic and the A/Brisbane/59/2007 Seasonal (H1N1) Influenza Virus Haemagglutinins Using mAbs and Escape Mutants. J Gen Virol 95(Pt_11): 2377–2389.
- Hostetter DR et al. (2007) Hip Is A Pro-Survival Substrate of Granzyme B. J Biol Chem 282(38): 27865–27874.
- Jin C et al. (2006) Immunoglobulin G Specifically Binding Plant N-glycans with High Affinity Could Be Generated in Rabbits But Not in Mice. Glycobiology 16(4): 349–357.
- Kuroki M et al. (2005) Preparation of Human IgG and IgM Monoclonal Antibodies for MK-1/Ep-CAM by Using Human Immunoglobulin Gene-Transferred Mouse and Gene Cloning of Their Variable Regions. Anticancer Res 25(6A): 3733–3739.
免疫学研究
- Flyak AI et al. (2015) Mechanism of Human Antibody-Mediated Neutralization of Marburg Virus. Cell 160(5): 893–903.
- Fang L et al. (2008) Essential Role of TNF Receptor Superfamily 25 (TNFRSF25) in The Development of Allergic Lung Inflammation. J Exp Med 205(5): 1037–1048.
- Matsumoto SC et al. (2006) Retinal Dysfunction in Patients with Chronic Chagas’ Disease Is Associated to Anti-Trypanosoma Cruzi Antibodies That Cross-React with Rhodopsin. FASEB J 21: 1–21.
がん研究
- Chen D et al. (2014) Increased Expression of Id1 and Id3 Promotes Tumorigenicity by Enhancing Angiogenesis and Suppressing Apoptosis in Small Cell Lung Cancer. Genes Cancer 5-6(May): 212–225.
- Stern HM et al. (2010) Development of Immunohistochemistry Assays to Assess GALNT14 and FUT3/6 in Clinical Trials of Dulanermin and Drozitumab. Clin Cancer Res 16(5): 1587–1596.
- Chen Y et al. (2007) Armed Antibodies Targeting The Mucin Repeats of The Ovarian Cancer Antigen, MUC16, Are Highly Efficacious in Animal Tumor Models. Cancer Res 67(10): 4924–4932.
- Wittman VP et al. (2006) Antibody Targeting to A Class I MHC-Peptide Epitope Promotes Tumor Cell Death. J Immunol 177(6): 4187–4195.
関連リンク
セルライン開発向け製品全般:
STEMCELL Technologies社の細胞株作製用製品
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ハイブリドーマの作製効率が飛躍的に向上「EasySep™ & ClonaCell™」
ClonaCell™-HYと96-Well Plateを用いたハイブリドーマの選択とクローニング
ClonaCell HY Hybridoma KitのTechnical Manual(英語)
組み換えタンパク発現用のCHO細胞株作製:
CHO細胞の増殖を促進するサプリメント「ClonaCell™-CHO Supplement」
ClonaCell-CHO半固体クローニングのガイドライン(英語)
細胞株クローニングのカスタマイズ:
ClonaCell FLEXを用いたセルライン産生プロトコル(英語)