STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Astrocyte Differentiation Kit
本品は、STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit（ST-08540）の後継品です。
- 研究用
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit（ST-100-0013）は、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit（ST-08581）を用いて作製したヒト多能性幹細胞（hPSC）由来の神経前駆細胞（NPC）から、アストロサイト（星状細胞）前駆体を迅速かつ効率的に作製する無血清培地です。
本品で作製したアストロサイト前駆体は、STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit（ST-100-0016）によってアストロサイトへと成熟させられます。これら一連の培養系を利用すれば、hPSCから高純度のアストロサイト集団（> 70% S100B-positive and > 60% GFAP-positive astrocytes; < 15% doublecortin-positive neurons）を7週間で作製し、長期培養で維持することができます。得られるアストロサイトは、ヒトの神経学的発生と疾患のモデリング、薬物スクリーニング、毒性試験、細胞療法の検証といったアプリケーションに使用できます。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kitで、hPSC由来NPCからアストロサイト前駆体を作製
- 組成が明確な、無血清培地
- 機能性アストロサイトの高効率な作製をサポート
- STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitで作製したNPCからの分化に最適化
- 複数のヒトES細胞およびiPS細胞株から再現性高く、皮質型アストロサイト前駆体を作製
アストロサイト分化の流れ
本品はアストロサイト前駆体への分化用培地です。アストロサイト前駆体からアストロサイトへの成熟には、STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit（ST-100-0016）が必要になります。
胚様体/Embryo Body（EB）形成からのワークフロー
再播種したEBから神経ロゼットを選択後、20日程度でhPSC由来NPCから皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
単層培養からのワークフロー
3回のシングルセル継代を経たhPSC由来NPCの単層培養から、21日程度で皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
データ紹介
皮質型アストロサイトの作製
TeSR™-E8™で維持されたhPSCからSTEMdiff SMADi Neural Induction Kit のEB法をもちいて作製したNPCを、STEMdiff Astrocyte Differentiation / Maturation Kitsで分化、成熟させました。各キットで3週間ずつ培養後に皮質型アストロサイトが得られました。
（A）細胞核の染色（DAPI、灰色）。得られた培養物には高純度のアストロサイト集団が含まれ、（B）60％超がGFAP陽性（緑）、（C）70％超がS100B陽性（マゼンタ）である一方、（D）ニューロン（DCX陽性細胞、シアン）は15％未満でした。スケールバー = 100 μm。
アストロサイトに特徴的な遺伝子発現
Embryonic stem and induced pluripotent stem cells from a variety of lines (n = 6, maintained in mTeSR™1 or TeSR™-E8™) were differentiated to NPCs using the STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit embryoid body protocol. Cells were then grown in STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit for 3 weeks followed by STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit for 3 weeks prior to analysis. Expression levels were measured by quantitative PCR (qPCR) and normalized to hPSC controls relative to housekeeping genes 18S and TBP.
hPSC由来ニューロンとの共培養による細胞間相互作用モデル
NPCs generated from the H1 cell line were differentiated to astrocytes using STEMdiff™ Astrocyte Differentiation and Maturation Kits. H9 cell-derived NPCs were differentiated to forebrain-type neurons using STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation and Maturation Kits. For co-culture, matured astrocytes were seeded onto forebrain neurons that had been in STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Medium for at least one week. Co-cultures were then switched to STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Medium the following day and for the remaining co-culture. (A) Neurons cultured alone, following the co-culture feeding schedule, are labeled with DCX (green). (B) DCX-positive neurons (green) and astrocytes (GFAP, red) can be co-cultured for at least 1 - 2 weeks prior to analysis.
共培養により、hPSC由来ニューロンの生存と成熟に与える影響
NPCs generated from the STiPS-R038 cell line were differentiated to astrocytes using STEMdiff™ Astrocyte Differentiation and Maturation Kits. STiPS-M001 cell-derived NPCs were differentiated to forebrain-type neurons using STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation and Maturation Kits. After co-culture for one week, neurons (A) had significantly increased neurite outgrowth as measured on MAP2-positive neurons with the NeuriteTracer plugin for ImageJ (M Pool et al. J Neurosci Methods, 2008) and (B) were more numerous than neurons cultured alone using the same feeding schedule. *, p < 0.05; **, p < 0.01.
